کلون کردن ژن جهش یافته آنتی ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس(pa) در باسیلوس سوبتیلیس

سابقه و هدف: آنتی  ­ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس پروتئینی با خاصیت اتصال به گیرنده­ های سطح تمام سلول­ های بدن انسان می­ باشد. در سطح سلول ­های سرطانی گیرنده اختصاصی فعال کننده یوروکینازی پلاسمینوژن (upa) ایجاد می ­شود که در سطح سایر سلول­ های نرمال بدن مشاهده نمی ­شوند. هدف از انجام این تحقیق تغییر جایگاه اتصال موجود بر روی pa با جهش ­زایی مستقیم می ­باشد به نحوی که این پروتئین فقط بتواند به سلول ­های سرطانی متصل گردد. مواد و روش ­ها: در طی این تحقیق پلاسمید pmna1 حاوی ژن pa به روش لیز قلیایی ازمیزبان خود جدا سازی شد. در ادامه با استفاده از پرایمر های فسفریله شده و استفاده از روش  pcr هم ­پوشان جهش هدفدار بر روی ژن pa صورت پذیرفت. در ادامه قطعه حاصله بطور مستقیم بر روی ناقل ptz57r کلون و به e.coli سویه dh5α انتقال یافت. با استفاده از آنزیم ­های برش دهنده kpni و sali ژن pa جهش یافته جدا و بر روی ناقل pwb980 انتقال داده شد. در آخر با استفاده از روش الکتروپوریشن به b.subtilis سویه wb600 انتقال یافت. یافته ­ها: طی این تحقیق در توالی ژن pa با روش soe pcr جهش ایجاد کرده که در پی آن کد ژنتیکی اسید ­آمینه 194 تغییر کرد. جهش ایجاد شده با تعیین ترادف بازی تأیید گردید. نتیجه­ گیری: سرطان مشهور به بیماری غیر قابل درمان و مرگ ­آور است. یکی از روش­ های درمان سرطان استفاده از توکسین­ های باکتریایی است البته در صورتی­که فقط به سلول ­های سرطانی آسیب برساند. لذا با استفاده از پروتئین تغییر یافته pa که فقط به سلول ­های سرطانی متصل می گردد می ­توان امیدی تازه در درمان سرطان ایجاد کرد.